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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:??刹《?11 型PCR檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):FS-P63392
  • 產(chǎn)品**:撫生
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
??刹《?11 型PCR檢測試劑盒注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
詳情介紹:

產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:??刹《?/span> 11 型PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P63392
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對照,6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)

氧氟沙星 Ofloxacin 82419-36-1 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

西紅花苷II(標(biāo)準(zhǔn)品) Crocin II 55750-84-0 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

(S)-10-羥基喜樹堿;10-羥基喜樹堿 (s)-10-hydroxycamptothecin 19685-09-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

組織腎素(renin)活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

細(xì)胞D-葡萄糖氧化法定量檢測試劑盒  進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

棉隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Dazomet 533-74-4 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%

咖啡甘素(dulcin)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

 細(xì)胞FSH-BETA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次

體液谷胱甘肽(GLUTATHIONE)總濃度熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次

核糖核酸酶 A 溶液 RNase A Solution 9001-99-4 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí),>60 U/mg,10 mg/ml

2,3',4,4'-四羥基二苯甲酮(>90.0%(GC)(T)) 2,3',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone 61445-50-9 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)(T)

動(dòng)物源性食品火雞源基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

4-叔丁基硫雜杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC)) 4-tert-Butylthiacalix[4]arene 182496-55-5 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)

DAABD-Cl [=4-[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,3-苯并惡二唑 DAABD-Cl [=4-[2-(Dimethylamino)ethylaminosulfonyl]-7-chloro-2,1,3-benzoxadiazole] 664985-43-7 質(zhì)量規(guī)格:用于蛋白質(zhì)組分析,用于高效液相色譜標(biāo)記,熒光染料,用于質(zhì)譜的衍生化試劑

溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:1毫升

銀椴苷;椴樹苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Tiliroside 20316-62-5 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

埃可病毒 11 型PCR檢測試劑盒血液增培養(yǎng)基    250(g)

乳糖膽鹽培養(yǎng)基    1000(g)

Honda氏產(chǎn)毒肉湯基礎(chǔ)    250(g)

緩沖MUG瓊脂 (BMA)    100(g)

炭疽桿診斷抗原    1ml炭疽桿檢測用配套試劑

葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 (CM0075)    Oxoid

Agar 瓊脂粉    Japan1kg

緩沖MUG瓊脂 (BMA)    100(g)

Salmonella enrichment broth acc.to RAPPAPORT 沙門氏富集肉湯    1.10236.0500MERCK默克

水楊素    1g進(jìn)口分裝,與HB116配套使用

 


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