實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63618
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

7-差向紫杉酚 7-epi-Taxol 105454-04-4 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

DL-酪氨酸 DL-Tyrosine 556-03-6 質(zhì)量規(guī)格：0.98

N'-Cbz-L-鳥氨酸 L-Orn(Z)-OH 3304-51-6 質(zhì)量規(guī)格：0.98

動物肝組織細胞分離培養(yǎng)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺(3-34) 酰胺(牛) [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine) 64297-16-1 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

雙(氨甲基)降莰烷(含有異構(gòu)體混合物)(>98.0%(T)) Bis(aminomethyl)norbornane (mixture of isomers) 56602-77-8 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

阿非迪霉素；艾菲地可寧 Aphidicolin from Nigrospora oryzae  38966-21-1 質(zhì)量規(guī)格：>98%,美國進口

體液二胺氧化酶（DAO）活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

2-硝基芴(>99.0%(HPLC)) 2-Nitrofluorene 607-57-8 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)

醋酸地塞米松 Dexamethasone Acetate 1177-87-3 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BP,BR,可用于細胞培養(yǎng)

腸胃活檢螺旋桿（H. PYLORI）亞甲基藍（METHYLENE BLUE）染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

 FITC綠色熒光標記一抗 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50微克

卡托普利 Captopril 62571-86-2 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP34,BR,可用于細胞培養(yǎng)

 組蛋白H4-K12乙酰化檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次等

薯蕷次皂苷A Prosapogenin A 19057-67-1 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

達比加群酯 Dabigatran etexilate 211915-06-9 質(zhì)量規(guī)格：>97%

乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒腸道增肉湯 英文名稱：Mossel-Enterobacteriaceae Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于腸桿科細的選擇性增培養(yǎng)用途:用于腸桿科細的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)Pancreatic Digest of Gelatin/胰酶 明膠消化物 10.0Glucose monohydrate /葡萄糖 5.0Disodium hydrogen phosphate dihydrate/磷酸氫二鉀 8.0Potassium dihydrogen phosphate/磷酸二氫鈉 2.0Dehydrated Ox Bile/脫水牛膽粉 20.0Brilliant Green/煌綠 0.015pH值7.2 ± 0.2 25℃用法Suspend 45.0g / liter,and heat to boiling for 1 to 2 minutes. Transfer 120-ml portions to 250-ml volumetric flasks or 9-ml portions to test tubes, all being capped with cotton plugs or loose-fitting caps. Heat at 100 °C for 30 min and cool immediately.稱取本品 45.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶每瓶 120ml或分裝試管 ,每管 9ml,100℃水浴加熱 30 分鐘 , 迅速在流動的冷水中冷卻,無需高壓滅。

MSA培養(yǎng)基 英文名稱：MSA Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：成分（g/L）胰蛋白胨水解物 10.0g胨 5.0g蔗糖 200.0g葡萄糖 1.0g磷酸氫二鉀（無水） 4.0g曲利苯蘭 0.075g結(jié)晶紫 0.008g桿肽 20IU瓊脂 16.0gpH值 7.6 25℃用 法稱取本品23.6克，加熱溶解于100ml蒸餾水中, 116℃高壓滅20分鐘，冷至50~55℃時，加入過濾除1%，亞碲溶液0.28ml，混勻。傾入無平皿，備用。

瓊脂培養(yǎng)基F(紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂) 英文名稱：Agar Medium F(Violet Red Bile Glucose Agar) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于腸道計數(shù)和腸桿科鑒別用途:用于腸道計數(shù)和腸桿科鑒別。用法Suspend 51.5g/liter, heat to boiling with frequent stirring until completely dissolved.稱取本品 51.5g,加熱溶解于 1000ml 純化水中,煮沸不要超過 2 分鐘,冷至 50℃左右時傾入無平皿。無需高壓滅。