
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:水泡性口炎病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63682
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對照,6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
全反式5,8-環(huán)氧視黃酸 (非對映異構(gòu)體混合物) all-trans 5,8-Epoxy Retinoic Acid (Mixture of Diastereomers) 3012-76-8 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
胰島素(牛) INSULIN 11070-73-8 質(zhì)量規(guī)格:BR,27U/mg,進(jìn)分
心房利鈉肽(1-28),大鼠 Atrial Natriuretic Peptide (1-28),rat 88898-17-3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
L-高苯丙氨酸 L-Homophenylalanine 943-73-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因cDNA產(chǎn)物 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50微克
載玻片細(xì)胞蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
DH5α電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10 X 100微升
血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Sanguinarine 2447-54-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
同位素核酸蛋白結(jié)合反應(yīng)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
鹽酸普拉克索 Pramipexole 2HCL monohydrate 191217-81-9 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.8
通用型福氏志賀氏(Shigella flexneri)基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
可溶性植物葉綠體高純總蛋白制備試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織甘油-3-磷酸脫氫酶(Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase)總活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
(S)-(+)-苯乙醇酸(普瑞巴林雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品) [(S)-(+)-MandelicAcid] (Pregabalin impurity) 17199-29-0 質(zhì)量規(guī)格:供檢查用
BAX蛋白共沉淀分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次
阿扎那韋硫酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Atazanavir sulfate 229975-97-7 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
水泡性口炎病毒PCR檢測試劑盒乳酸桿選擇性瓊脂 英文名稱:Lactobacillus Selective Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于乳酸桿檢測和分離培養(yǎng)產(chǎn)品用途:用于乳酸檢測和分離培養(yǎng)產(chǎn)品用法:稱取本品84.7克,于1000ml蒸餾水中,并吸取1.32ml冰乙酸,混勻,加熱溶解并不停攪拌,冷至50℃左右時(shí),傾入無平皿,無需高壓滅。
APT瓊脂 英文名稱:APT Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于乳酸分離培養(yǎng)新產(chǎn)品,用于乳酸分離培養(yǎng)
BL瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:BL Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于雙岐桿分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))用途:用于雙歧桿的分離培養(yǎng)。用法稱取本品 56.23g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
BBL瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:BBL Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于雙岐桿分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))用途:用于雙歧桿的分離培養(yǎng)。用 法稱取本品70克,再吸取吐溫-80 1ml,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝三角瓶,115℃高壓滅20分鐘,備用。質(zhì)量控制和典型特征:將厭氧罐置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h±3h雙歧桿典型特征為落中等大小,表面光滑、凸起,邊緣整齊呈奶油色,質(zhì)地柔軟、細(xì)膩。
TPY瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:TPY Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于雙岐桿分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))用途:用于雙歧桿的分離培養(yǎng)。成分(g/L)水解酪蛋白 10.0大豆胨 5.0酵母粉 2.0葡萄糖 5.0L-半胱氨酸 0.5磷酸氫二鉀 2.0氯鎂 0.5硫酸鋅 0.25氯鈣 0.15氯鐵 0.000001瓊脂 20.0吐溫80 1.0pH值6.5 ± 0.1 25℃用法稱取本品 46.4g ,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅15min-20min,備用。
PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱:PYG Broth Medium Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于雙岐桿增培養(yǎng),使用時(shí)需加入氯血紅素和維生素K1(GB標(biāo)準(zhǔn))用途:用于雙歧桿的增培養(yǎng)。成分(g/520ml)蛋白胨 20.0葡萄糖 5.0酵母浸粉 10.0氯鈉 0.08半胱氨酸鹽酸鹽 0.5氯鈣 0.008硫酸鎂 0.008磷酸氫二鉀 0.08碳酸氫鈉 0.4pH值7.2 ± 0.1 25℃用法稱取本品 36.1g,加熱溶解于520ml 蒸餾水中,115℃高壓滅 15 分鐘,冷至 50℃左右時(shí),加入過濾除的維生素 K1溶液 0.5ml 和氯血紅素溶液(5mg/ml ) 2.5ml,混勻,備用。注:維生素 K1 溶液配制方法:稱取維生素 K1 1g ,加入無水乙醇 99ml,過濾除。氯血紅素溶液配制方法:稱取氯血紅素 0.5g 溶于1mol/L 氫鈉溶液 1ml 中加蒸餾水至 100ml ,121℃高壓滅,冰箱保存。
APT肉湯 英文名稱:APT Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于異質(zhì)發(fā)酵乳酸桿和其它需高含量鹽酸硫酸胺素的培養(yǎng)。1、產(chǎn)品用途:用于異質(zhì)發(fā)酵乳酸桿和其它需高含量鹽酸硫酸胺素的培養(yǎng)。2、產(chǎn)品用法:稱取本品46.2g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅15min,備用。3、質(zhì)量控制方法:乳酸桿。
乳酸桿肉湯培養(yǎng)基 英文名稱:Lactobacillus broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于乳酸桿增培養(yǎng)用途:用于乳酸桿增培養(yǎng)。成分(g/L)胨化乳 15.0酵母浸粉 5.0磷酸二氫鉀 2.0葡萄糖 10.0蕃茄浸出粉 2.5吐溫80 1.0pH值6.8 ± 0.2 25℃用法稱取本品35.5g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
MRS肉湯 英文名稱:MRS Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于食品中乳酸的選擇性增培養(yǎng)用途:用于食品中乳酸的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉粉 8.0酵母粉 4.0葡萄糖 20.0磷酸氫二鉀 2.0檸檬酸氫二銨 2.0乙酸鈉 5.0硫酸鎂 0.2硫酸錳 0.04吐溫80 1.0pH值5.7 ± 0.2 25℃用法稱取本品 52.4g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,118℃高壓滅 15 分鐘,備用。