細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	BNL CL.2小鼠胚胎肝細(xì)胞	英文名稱	BNL CL.2
產(chǎn)品貨號	AXB10091	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	肝	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 BNL CL.2細(xì)胞是在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立的細(xì)胞株；檢測表明，BNL CL.2細(xì)胞肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

年齡（性別） 胚胎

組織來源 肝

細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞

生物等級 1

致瘤性 No, the cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium.

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; TIB-73 BCRC; 60180

MCART2蛋白抗體    MCART2

19號染色體開放閱讀框45抗體    C19orf45

SHISA蛋白家族9抗體  Anti-SHISA9    補(bǔ)體應(yīng)答基因32抗體  Anti-RGC32

B細(xì)胞鏈接激活蛋白抗體  Anti-NTAL    色氨酸豐富蛋白抗體  Anti-WRB/CHD5

TMEM157蛋白抗體    TMEM157

X染色體開放閱讀框31抗體   CXorf31

應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體  Anti-SISP1/GI24    嗜酸性粒細(xì)胞顆粒關(guān)鍵堿性蛋白抗體  Anti-PRG2

磷酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體  Anti-Phospho-Pin1 (Ser16)    TTC33蛋白抗體  Anti-TTC33

Cy3標(biāo)記小鼠IgM    Mouse IgM / Cy3

H2A組蛋白家族E蛋白抗體    H2A1J/HIST1H2AK

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)elisa分析檢測試劑盒    MMP-13 ELISA kit

小鼠25羥基膽固醇(25-OHC)elisa分析檢測試劑盒    25-OHCELISAkit

硫酸乙酰肝素6腦苷脂轉(zhuǎn)硫酸酶1抗體    HS6ST1

BNL CL.2小鼠胚胎肝細(xì)胞丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體    ACY3

LSM4蛋白抗體    LSM4

細(xì)胞色素P450 A43抗體    CYP3A43

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。