商品屬性：

產品名稱	hTERT-HPNE（人胰腺導管細胞）	英文名稱	hTERT-HPNE
產品貨號	AXB9834	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性	貼壁生長	細胞形態(tài)	上皮細胞樣
產品種屬	人	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
組織來源	胰腺	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

細胞別稱；hTERT-HPNE；人胰腺導管上皮細胞

種屬來源；人

組織來源；胰腺

生長特性；貼壁生長

細胞形態(tài)；上皮細胞樣

細胞代數(shù)；10代以內

背景介紹；hTERT- hpne細胞系是通過逆轉錄病毒表達載體(逆轉錄病毒表達載體pBABEpuro)轉導人胰管產生的，該載體含有hTERT基因。受感染的細胞端粒酶呈陽性，但未衰老，在Ref的文獻中傳代150多次后仍在增殖。

細胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測；無

培養(yǎng)基；70.5%DMEM（無糖）+23.5% Medium M3+5%FBS+10ng/ml重組人表皮生長因子EGF+750ng/ml嘌呤霉素+2.5g/L  D-葡萄糖+PS

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

細胞培養(yǎng)操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。
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