細胞培養(yǎng)操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NIH/3T3小鼠胚胎細胞	英文名稱	NIH/3T3:NIH3T3
產(chǎn)品貨號	A01X1090	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細胞	細胞形態(tài)	成纖維細胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	胚胎	用途	僅供科研研究實驗

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% CS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 NIH/3T3細胞是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細胞株。為了培育在形態(tài)學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了5輪以上亞克隆。NIH/3T3細胞對肉瘤病毒的轉化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉化及轉染研究十分有用；NIH/3T3細胞鼠痘病毒陰性。

年齡（性別） 胚胎

組織來源 胚胎

細胞類型 自發(fā)永生化細胞

生物等級 1

倍增時間 ~20小時

保藏機構 ATCC; CRL-1658 ATCC; CRL-6442DSMZ; ACC-59 ECACC; 93061524

Protein Z       后期促進復合蛋白3抗體

A型流感聚合酶堿性蛋白2抗體       Influenza A Polymerase basic protein 2

小鼠溶酶體酸性磷酸酶2(ACP2)elisa檢測試劑盒       蛋白Z抗體

抗原涂板（COATING）緩沖液       人G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)elisa檢測試劑盒免費代測

UBX結構域域蛋白D2抗體  Anti-UBXD2       神經(jīng)特異蛋白酪氨酸磷酸酶N5抗體  Anti-PTPN5/STEP

錨蛋白重復結構域38抗體       ANKRD38

大鼠TAR DNA結合蛋白43(TARDBP)elisa檢測試劑盒      CDC27

細胞色素氧化酶裝配因子PET112抗體  Anti-PET112L       SNAPC3蛋白抗體  Anti-SNAPC3鋅指蛋白BED抗體       ZBED2

環(huán)境鎂離子濃度化學比色法定量檢測試劑盒       山羊白介素6(IL-6)elisa檢測試劑盒

辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgM       Goat Anti-Human IgM / HRP

犬B細胞瘤因子2(Bcl-2)elisa生化檢測試劑盒       Bcl-2 ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體β(PPAR-β)elisa生化檢測試劑盒       PPAR-βELISAKit

猴白介素6(IL-6)elisa生化檢測試劑盒       IL-6 ELISA Kit

NIH/3T3小鼠胚胎細胞人兒茶酚胺(CA)elisa生化檢測試劑盒       CAELISAKit

魚生長(GH)elisa生化檢測試劑盒       大鼠抗繆勒管(AMH)elisa檢測試劑盒

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。