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PCR試劑盒的特性與注意事項
日期：2025-05-10 04:10
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摘要：
PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液，自備模板和引物即可進行PCR反應(yīng)，適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測，也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。
Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，95℃孵育時的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性，有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性，因此在DNA聚合過程中相當(dāng)于核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用，*終會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3'末端會產(chǎn)生3'-dA overhangs，即產(chǎn)生帶一個A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase為重組酶，通過大腸桿菌表達純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
注意事項：
由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Taq酶時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯幾率約為2.2×10-5，對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BalbTaq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測，Taq DNA polymerase是好的選擇。
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