
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產品名稱:漢灘病毒PCR檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
產品貨號:FS-P63610
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
NAD;氧化型輔酶I;β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸水合物 β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate(β-NAD) 53-84-9 質量規(guī)格:>98%,BR
蛋白酶3底物1m,熒光 Caspase 3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC 169322-61-0 質量規(guī)格:>95%,BR
細胞SGK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規(guī)格:20次
N-乙酰-DL-亮氨酸 N-Acetyl-DL-leucine 99-15-0 質量規(guī)格:0.98
五味子酚(標準品) schisanhenol 69363-14-0 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
組織白細胞介素-1β轉換酶(ICE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
膽堿酯酶(CHE)定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:50次
利福霉素鈉;利福霉素SV鈉 Rifamycin sodium salt 14897-39-3 質量規(guī)格:>900IU/mg ,BR
6-O-去甲多奈哌齊 6-O-Desmethyl Donepezil 120013-56-1 質量規(guī)格:美國進口
真/酵母蛋白巰基/結合巰基含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒 進口/國產 規(guī)格:50次
十八烷醇,1-十八醇(標準品) 1-Octadecanol 112-92-5 質量規(guī)格:>98%,標準品
動物組織冰凍切片糖蛋白高希爾(PAS)法阿爾新藍(ALCIAN BLUE)染色試劑盒 進口/國產 規(guī)格:50次
乳果糖(標準品) Lactulose 4618-18-2 質量規(guī)格:含量測定
細胞色素P450亞酶CYP3A1(BROD)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
4-磺酰杯[4]芳烴水合物(>94.0%(T)) 4-Sulfocalix[4]arene Hydrate 112269-92-8 質量規(guī)格:>94.0%(T)
漢灘病毒PCR檢測試劑盒EEM培養(yǎng)基 英文名稱:EEM medium 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于致病性大腸桿的增培養(yǎng)和腸桿的增培養(yǎng)產品用法: 稱取本品 43.5g ,溶解于 1000ml蒸餾水中,分裝試管,經(jīng) 100℃流動蒸汽滅 30 分鐘,備用。無需高壓滅。產品用途:用于致病性大腸桿的增培養(yǎng)和腸桿的增培養(yǎng)
胰蛋白胨膽鹽瓊脂 英文名稱:Tryptone Bile Agar 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于大腸桿的膜過濾法選擇性培養(yǎng)(ISO標準)用途:濾膜法快速檢測水中大腸桿和大腸群用法稱取本品 36.5g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用
Elek氏培養(yǎng)基 英文名稱:Elek Medium 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于致瀉大腸埃希氏的產毒培養(yǎng)用途:用于致瀉大腸埃希氏的測定。成分(g/L)蛋白胨 20.0麥芽糖 3.0乳糖 0.7氯鈉 5.0瓊脂 14.0pH值7.8 ± 0.1 25℃用法稱取本品 43.7g,加入 1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅 15分鐘,備用。
大腸群快檢紙片(水源水) 英文名稱:Coliform bacteria detective plate 產品規(guī)格:5份/包 產品用途:用于水質檢驗主要用于水質檢驗,方便、快捷、迅速!在2-8℃冰箱保存,鋁箔袋打開后,未用的測試紙片要放回袋中重新封好,放到冰箱中,一個月內用完。
MFC肉湯 英文名稱:MFC Broth 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于大腸群的濾膜法檢測MFC肉湯是公司改良的培養(yǎng)基,用于大腸群的濾膜法檢測。
MFC瓊脂 英文名稱:MFC Agar 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于大腸群的濾膜法檢測用途用于生活飲用水及其水源水中糞大腸群測定。成分(g/L)多價蛋白胨 5.0g胰蛋白胨 10.0g乳糖 12.5g酵母粉 3.0g三號膽鹽 1.5g氯鈉 5.0g藍 0.1g瓊脂 15.0gPH值 7.4±0.2用 法稱取本品52.3克,加熱煮沸溶解于1000ml蒸餾水中,冷卻至45-50℃時,傾入無平皿。無需高壓滅。
煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 英文名稱:Brilliant Green Lactose Bile Broth 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于大腸群、大腸桿的測定(GB、SN標準)用途:用于大腸群的確證試驗。成分(g/L)蛋白胨 10.0乳糖 10.0牛膽粉 20.0煌綠 0.0133pH值 7.2±0.1 25℃用法稱取本品40.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝到有倒立發(fā)酵管的20mm*150mm 試管中,每管 10ml,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
Voges-Proskauer(V-P)試劑 英文名稱:V-P Box 產品規(guī)格:5ml*4 產品用途:用于V-P試驗V-P試劑是Voges-Proskauer試劑的簡稱,用于V-P試驗。1、成分甲液α-萘酚 5.0g無水乙醇 100.0ml乙液氫鉀 40.0g用蒸餾水加至1000ml2、試驗方法將3%氯鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生長物接種3%氯鈉MR-VP培養(yǎng)基,36℃士1℃培養(yǎng)48h。取1ml培養(yǎng)物轉放到一個試管內,加0.6ml甲液,搖動。加0.2ml乙液,搖動。隨意加一點肌酸結晶,4h后觀察結果。陽性結果是呈伊紅的粉紅色。
pH7.3PBS緩沖液 英文名稱:PBS 產品規(guī)格:250g 產品用途:PBS是Tris-HCl緩沖鹽溶液PBS是Tris-HCl緩沖鹽溶液,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液
MEE肉湯 英文名稱:MEE Broth 產品規(guī)格:250g 產品用途:用于腸道的選擇性增培養(yǎng)(SN標準)用途:用于腸桿選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 10.0葡萄糖 5.0磷酸氫二鈉 6.45磷酸二氫鉀 2.0三號膽鹽 10.0煌綠 0.015pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 33.5g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,于沸水中加熱 30 分鐘,迅速冷卻培養(yǎng)基分裝于17mm × 170mm 試管中,每管 10ml ,無需高壓滅,0 - 5℃可存放一周。