實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：乙型腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P63618
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

7-差向紫杉酚 7-epi-Taxol 105454-04-4 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

DL-酪氨酸 DL-Tyrosine 556-03-6 質(zhì)量規(guī)格：0.98

N'-Cbz-L-鳥(niǎo)氨酸 L-Orn(Z)-OH 3304-51-6 質(zhì)量規(guī)格：0.98

動(dòng)物肝組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺(3-34) 酰胺(牛) [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine) 64297-16-1 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

雙(氨甲基)降莰烷(含有異構(gòu)體混合物)(>98.0%(T)) Bis(aminomethyl)norbornane (mixture of isomers) 56602-77-8 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

阿非迪霉素；艾菲地可寧 Aphidicolin from Nigrospora oryzae  38966-21-1 質(zhì)量規(guī)格：>98%,美國(guó)進(jìn)口

體液二胺氧化酶（DAO）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

2-硝基芴(>99.0%(HPLC)) 2-Nitrofluorene 607-57-8 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)

醋酸地塞米松 Dexamethasone Acetate 1177-87-3 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

腸胃活檢螺旋桿（H. PYLORI）亞甲基藍(lán)（METHYLENE BLUE）染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

 FITC綠色熒光標(biāo)記一抗 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50微克

卡托普利 Captopril 62571-86-2 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

 組蛋白H4-K12乙酰化檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次等

薯蕷次皂苷A Prosapogenin A 19057-67-1 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

達(dá)比加群酯 Dabigatran etexilate 211915-06-9 質(zhì)量規(guī)格：>97%

乙型腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒腸道增肉湯 英文名稱(chēng)：Mossel-Enterobacteriaceae Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于腸桿科細(xì)的選擇性增培養(yǎng)用途:用于腸桿科細(xì)的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)Pancreatic Digest of Gelatin/胰酶 明膠消化物 10.0Glucose monohydrate /葡萄糖 5.0Disodium hydrogen phosphate dihydrate/磷酸氫二鉀 8.0Potassium dihydrogen phosphate/磷酸二氫鈉 2.0Dehydrated Ox Bile/脫水牛膽粉 20.0Brilliant Green/煌綠 0.015pH值7.2 ± 0.2 25℃用法Suspend 45.0g / liter,and heat to boiling for 1 to 2 minutes. Transfer 120-ml portions to 250-ml volumetric flasks or 9-ml portions to test tubes, all being capped with cotton plugs or loose-fitting caps. Heat at 100 °C for 30 min and cool immediately.稱(chēng)取本品 45.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶每瓶 120ml或分裝試管 ,每管 9ml,100℃水浴加熱 30 分鐘 , 迅速在流動(dòng)的冷水中冷卻,無(wú)需高壓滅。

MSA培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：MSA Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：成分（g/L）胰蛋白胨水解物 10.0g胨 5.0g蔗糖 200.0g葡萄糖 1.0g磷酸氫二鉀（無(wú)水） 4.0g曲利苯蘭 0.075g結(jié)晶紫 0.008g桿肽 20IU瓊脂 16.0gpH值 7.6 25℃用 法稱(chēng)取本品23.6克，加熱溶解于100ml蒸餾水中, 116℃高壓滅20分鐘，冷至50~55℃時(shí)，加入過(guò)濾除1%，亞碲溶液0.28ml，混勻。傾入無(wú)平皿，備用。

瓊脂培養(yǎng)基F(紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂) 英文名稱(chēng)：Agar Medium F(Violet Red Bile Glucose Agar) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于腸道計(jì)數(shù)和腸桿科鑒別用途:用于腸道計(jì)數(shù)和腸桿科鑒別。用法Suspend 51.5g/liter, heat to boiling with frequent stirring until completely dissolved.稱(chēng)取本品 51.5g,加熱溶解于 1000ml 純化水中,煮沸不要超過(guò) 2 分鐘,冷至 50℃左右時(shí)傾入無(wú)平皿。無(wú)需高壓滅。