細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)，請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。

產(chǎn)品名稱：大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞

產(chǎn)品英文：DI TNC1

貨號(hào)：BH-X019709

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S  

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

熱休克蛋白-60抗體  Anti-HSP-60   0.1ml

熱休克蛋白-70抗體  Anti-HSP-70    0.1ml

熱休克蛋白90α抗體  Anti-HSP-90α   0.1ml

熱休克蛋白-90β 抗體  Anti-HSP-90β    0.1ml

 絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶抗體  anti-HtrA2/Omi  0.2ml

端粒酶抗體  Anti-hTRT  Telomerase catalytic subunit   0.1ml

兔抗人血清抗體  抗血清Anti-Human ows\system32\networkexplore

大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：RAB5A ELISA Kit，英文縮寫：RAB5A，產(chǎn)品別名：RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)ELISA檢測(cè)試劑盒，RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶50(NαA50)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：NαA50 ELISA Kit，英文縮寫：NαA50，產(chǎn)品別名：N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶50(NαA50)ELISA檢測(cè)試劑盒，N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶50(NαA50)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Palmdelphin蛋白(PALMD)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PALMD ELISA Kit，英文縮寫：PALMD，產(chǎn)品別名：Palmdelphin蛋白(PALMD)ELISA檢測(cè)試劑盒，Palmdelphin蛋白(PALMD)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

NADH脫氫酶6(ND6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ND6 ELISA Kit，英文縮寫：ND6，產(chǎn)品別名：NADH脫氫酶6(ND6)ELISA檢測(cè)試劑盒，NADH脫氫酶6(ND6)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Lebercilin蛋白(LCA5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LCA5 ELISA Kit，英文縮寫：LCA5，產(chǎn)品別名：Lebercilin蛋白(LCA5)ELISA檢測(cè)試劑盒，Lebercilin蛋白(LCA5)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

HtrA絲氨酸肽酶4(HTRA4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HTRA4 ELISA Kit，英文縮寫：HTRA4，產(chǎn)品別名：HtrA絲氨酸肽酶4(HTRA4)ELISA檢測(cè)試劑盒，HtrA絲氨酸肽酶4(HTRA4)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

F-框蛋白32(FBXO32)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FBXO32 ELISA Kit，英文縮寫：FBXO32，產(chǎn)品別名：F-框蛋白32(FBXO32)ELISA檢測(cè)試劑盒，F(xiàn)-框蛋白32(FBXO32)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DNAJC12 ELISA Kit，英文縮寫：DNAJC12，產(chǎn)品別名：DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)ELISA檢測(cè)試劑盒，DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

CREB/ATFBZIP轉(zhuǎn)錄因子(CREBZF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CREBZF ELISA Kit，英文縮寫：CREBZF，產(chǎn)品別名：CREB/ATFBZIP轉(zhuǎn)錄因子(CREBZF)ELISA檢測(cè)試劑盒，CREB/ATFBZIP轉(zhuǎn)錄因子(CREBZF)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

CD163分子(CD163)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CD163 ELISA Kit，英文縮寫：CD163，產(chǎn)品別名：CD163分子(CD163)ELISA檢測(cè)試劑盒，CD163分子(CD163)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Battenin蛋白(BTS)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：BTS ELISA Kit，英文縮寫：BTS，產(chǎn)品別名：Battenin蛋白(BTS)ELISA檢測(cè)試劑盒，Battenin蛋白(BTS)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。