細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	GFP標(biāo)記小鼠成肌細(xì)胞;C2C12-GFP	英文名稱	C2C12-GFP
產(chǎn)品貨號	AXB10539	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成肌細(xì)胞
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
組織來源	肌肉 品系：C3H	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：C2c12; C2-C12; C12；小鼠成肌細(xì)胞

種屬來源：小鼠

年齡性別：

組織來源：肌肉 品系：C3H

生長特性：貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)：成肌細(xì)胞

背景簡介：2C12細(xì)胞是由D. Yaffe 和 O. Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克隆(由H. Blau等人構(gòu)建)。C2C12細(xì)胞株分化很快，形成可伸縮的肌管并**特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理，導(dǎo)致分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換成成骨細(xì)胞。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

生物等級：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測：無

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1772 BCRC; 60083 BCRJ; 0058 DSMZ; ACC-565

培養(yǎng)基：DMEM+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

倍增時(shí)間：~20 hours

甲型流感病毒(H2N2)血凝素抗體       H2N2 Hemagglutinin

TRIM50蛋白抗體  Anti-TRIM50       脯氨酸羥化酶抗體  Anti-PHD3

中性鞘磷脂2抗體       NSMase2

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體       phospho-MEK5 (Ser142)

乙型肝炎X蛋白HBX抗體（N端）  Anti-X protein/HB-X (N-Terminus)       背板膠質(zhì)乙酰酯酶抗體  Anti-NOTUM

6磷酸果糖激酶抗體  Anti-PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase       絲氨酸蛋白酶抑制劑A10抗體  Anti-ZPI/SERPINA10

嗅覺受體5J2抗體      OR5J2

單鏈結(jié)合蛋白70抗體  Anti-RPA70       分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體  Anti-SFRP1人過氧化氫酶(CAT)elisa分析檢測試劑盒       CATELISAkit

細(xì)胞生長抑制蛋白26/前列腺特異性膜抗原樣蛋白抗體       FOLH1B

大鼠α1抗胰蛋白酶前體(pre-α1-AT)elisa分析檢測試劑盒       pre-α1-AT ELISA Kit

石蠟切片KUNEL測定試劑盒       大鼠纖維蛋白原(FG)elisa檢測試劑盒

酵母硫氰酸酶（rhodanase）活性比色法定量檢測試劑盒       小鼠B細(xì)胞活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)elisa檢測試劑盒

轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體       LMCD1

GFP標(biāo)記小鼠成肌細(xì)胞;C2C12-GFP血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體       Cullin 5

NBPF7蛋白抗體       NBPF7

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。