細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)	GL-261小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤	英文名稱(chēng)	GL-261:GL261
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X1052	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來(lái)源	膠質(zhì)瘤	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱(chēng)：GL-261；小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞

種屬來(lái)源：小鼠

年齡性別：

組織來(lái)源：膠質(zhì)瘤

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：1939年3-甲基膽蒽顱內(nèi)注射誘導(dǎo)Gl261腫瘤，經(jīng)C57BL/6小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)同基因小鼠株連續(xù)移植維持，于1990年代中期建立體外生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng);文獻(xiàn)中描述了攜帶TP53和KRAS突變的細(xì)胞

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：

培養(yǎng)基：90% DMEM+10% FBS+雙抗

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框152抗體       C9orf152

腫瘤壞死因子受體超家族成員27抗體  Anti-EDA2R       磷酸化蛋白酶活化受體4抗體  Anti-Phospho-PAR4 (Thr163)

丙型肝炎病毒NS5A反式蛋白13抗體       NOLC1

磷酸化間變型瘤激酶抗體       phospho-ALK (Tyr1586)

P53應(yīng)答基因蛋白5抗體  Anti-WFDC5       痛覺(jué)調(diào)節(jié)肽NPFF抗體  Anti-NPFF/FMRFamide

半胱天冬酶-3酶原抗體  Anti-pro-caspase-3       突觸結(jié)合蛋白10抗體  Anti-Synaptotagmin X

DPY19L3蛋白抗體      DPY19L3

環(huán)指蛋白190抗體  Anti-RNF190       突觸結(jié)合蛋白4抗體  Anti-Synaptotagmin-4人核因子κB(NF-κB)elisa分析檢測(cè)試劑盒       HumanNF-κBELISAKit

組織蛋白酶H輕連抗體       Cathepsin H light chain

大鼠β防御素2(DEFB2)elisa分析檢測(cè)試劑盒       DEFB2 ELISA kit

魚(yú)透明質(zhì)酸(HA)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ1(GSTθ1)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-9）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒       人脯氨酸肽酶(PEPD)elisa檢測(cè)試劑盒

LIM源框蛋白1抗體       LIM1

GL-261小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤促凋亡Bik蛋白抗體       Bik

原鈣粘蛋白γA12抗體       PCDHGA12

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。