細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞	英文名稱	MHCC-97H:MHCC97H
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X853	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來(lái)源	肝臟	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞別稱：MHCC-97H；人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：人

年齡性別：

組織來(lái)源：肝臟

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：MHCC-97H細(xì)胞來(lái)源于中山醫(yī)院，用人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H接種裸鼠，進(jìn)行3次肺轉(zhuǎn)移篩選，取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮下接種后高度自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞系。

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：

培養(yǎng)基：89%DMEM+10%FBS+1%PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

XRN1       內(nèi)質(zhì)網(wǎng)退化蛋白3抗體

肌管素相關(guān)蛋白2抗體       MTMR2

可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體  Anti-sVEGFR2       XRN1蛋白抗體

結(jié)構(gòu)蛋白家族1抗體  Anti-TCTN1       Ras相關(guān)雌調(diào)節(jié)生長(zhǎng)抑制蛋白  Anti-RERG

人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠單抗  Anti-SM Myosin (Smooth Muscle)       細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體  Anti-NR1D1/REV-ERB alpha

22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體       C22orf26

跨膜受體蛋白Notch-3抗體  Anti-Notch3/4      DERL3

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白5抗體  Anti-RBBP5       MED17抗體  Anti-TRAP80/MED17/CRSP77山羊甲狀旁腺(PTH)elisa生化檢測(cè)試劑盒       PTHELISAkit

人4-羥基壬烯酸(HNE)elisa檢測(cè)試劑盒       組織人類巨細(xì)胞病毒（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法

大鼠肥胖抑制素elisa生化檢測(cè)試劑盒       Rat Obestatin ELISA Kit

形態(tài)肖爾（shorr）染色試劑盒       大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)elisa檢測(cè)試劑盒

植物游離吲哚-3-（IAA）熒光定量檢測(cè)試劑盒（包括萃?。?span>       小鼠1,25二羥基維生素D3(1,25 DHVD3)elisa生化檢測(cè)試劑盒

JAGN1蛋白抗體       JAGN1

MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物2抗體       APOBEC2

大鼠B-細(xì)胞激活因子(BAFF)elisa檢測(cè)試劑盒       小鼠腦啡肽原B(PDYN)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。