細胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MKN-45人胃癌細胞	英文名稱	MKN-45:MKN45
產(chǎn)品貨號	A01X857	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	半貼半懸	細胞形態(tài)	圓形
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	說明書	用途	僅供科研研究實驗

生長特性 半貼半懸

細胞形態(tài) 圓形

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 MKN-45 細胞是由 Hojo H建立，源于日本一位62歲低分化胃腺癌女性患者的肝轉(zhuǎn)移灶。

年齡（性別） 女；62歲

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 胃癌細胞

生物等級 1

倍增時間 ~30-60 hours

GTPBP2       動力蛋白輕鏈Tctex-3抗體

氧固醇結(jié)合蛋白樣10抗體       OSBPL10

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SIK2抗體  Anti-SNF1LK2/SIK2       G蛋白結(jié)合蛋白2抗體

血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體  Anti-Thrombomodulin/CD141       孕誘導(dǎo)阻斷因子抗體  Anti-PIBF

鋅指蛋白ZBTB8A抗體  Anti-ZBTB8A       核受體蛋白NR2E3抗體  Anti-NR2E3

鈣結(jié)合蛋白樣39抗體       CAB39L

蛋白激酶C亞型G抗體  Anti-PKC-γ/SCA14      DYNLT3

RNA結(jié)合蛋白20抗體  Anti-RBM20       AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調(diào)蛋白28抗體  Anti-SCA28/AFG3L2人骨膜蛋白/成骨細胞特異性因子2(POSTN)elisa生化檢測試劑盒       POSTNELISAkit

N-乙酰轉(zhuǎn)移酶8B抗體  Anti-NAT8B       鋅指蛋白340抗體  Anti-ZBTB46/ZNF340/BTBD4

大鼠P0蛋白(p0)elisa生化檢測試劑盒       p0 ELISA Kit

半乳糖基轉(zhuǎn)移酶（galactosyl transferase）       人α-烯醇化酶(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)elisa生化檢測試劑盒

大鼠白介素23受體(IL23R)elisa檢測試劑盒       小鼠透明質(zhì)酸(HA)elisa檢測試劑盒

脂肪分解刺激脂蛋白受體抗體       LSR/Lipolysis Stimulated Lipoprotein Receptor

MKN-45人胃癌細胞B細胞遷移基因4抗體       BTG4

L選擇素抗體  Anti-L-Selectin/CD62L       環(huán)指蛋白133抗體  Anti-RNF133

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。