商品屬性：
產品名稱
英文名稱
L929-LUC
產品貨號
AXB10666
培養(yǎng)條件
氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性
貼壁生長
細胞形態(tài)
成纖維細胞
產品種屬
小鼠
凍存條件
無血清凍存液，液氮儲存
組織來源
皮下結締組織
用途
僅供科研研究實驗
商品詳情：
細胞別稱；L929-LUC；小鼠成纖維細胞-LUC；小鼠成纖維細胞-綠色熒光蛋白
種屬來源；小鼠
組織來源；皮下結締組織
生長特性；貼壁生長
細胞形態(tài)；成纖維細胞
細胞代數；10代以內
背景簡介；Luciferase L929細胞穩(wěn)定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持。可用作螢光蛋白活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。1948年三月建立了NCTC
clone 929(小鼠結締組織)，細胞系L的克隆。細胞系L是早建立的連續(xù)培養(yǎng)細胞系之一，而clone 929是早的克隆株。從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結締組織入脂肪組織中建立了親本細胞系L。 第95代的細胞系L使用毛細管法分離單細胞建立了clone929。檢測發(fā)現鼠痘病毒陰性。
生物等級；1
細胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機構；ATCC; CCL-1 ATCC; CRL-6364
BCRC; 60091 BCRJ; 0188 DSMZ; ACC-2 ECACC; 85011425 ECACC; 85103115 ECACC;
88102702
培養(yǎng)基；90%MEM+10%FBS+PS+1.0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
細胞培養(yǎng)操作：
1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。
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