產品名稱
人真皮成纖維細胞
產品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
皮膚組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
分類
人原代細胞
貨號
A01X1400
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
人真皮成纖維細胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——層與網狀層。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
方法簡介：
公司實驗室分離的人真皮成纖維細胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人真皮成纖維細胞經Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
公司正在出售的產品：
人水通道蛋白-2（AQP2）elisa檢測試劑盒
胰島素基因增強結合蛋白2抗體
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DNA修復酶相互作用蛋白抗體
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小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP 5b）elisa檢測試劑盒
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原基因18家族STMN3蛋白抗體 Anti-STMN3
乙型肝炎病毒X蛋白上調基因11抗體
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DENND1C蛋白抗體
DENND1C
蛋白磷酸酶2抗體 Anti-SHP-2/PTPN11
核抑制蛋白磷酸酶1抗體 Anti-NIPP1/ARD1
視黃醛脫氫酶2型抗體 Anti-RALDH2
TBR1蛋白抗體 Anti-TBR1
大鼠封閉蛋白4(CLDN4)elisa分析檢測試劑盒
人真皮成纖維細胞CLDN4 ELISA Kit
豚鼠白介素13(IL-13)elisa分析檢測試劑盒
CMAP; CST 7; CST7; Cystatin 7; Cystatin-7; Cystatin7; Cystatin like metastasis associated protein; CystatinF; Cystatin-F; Cystatin F; Leukocystatin.
人真皮毛細胞
小鼠結腸粘膜上皮細胞
NCI-H295R人腎上腺皮質細腺癌細胞
DC2.4（小鼠樹突狀瘤細胞）