實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
兔結(jié)腸成纖維細胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。結(jié)腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結(jié)締組織內(nèi)。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的結(jié)腸成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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結(jié)腸 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2057 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔結(jié)腸成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介：
實驗室分離的兔結(jié)腸成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔結(jié)腸成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導因子(TWEAK)elisa檢測試劑盒
小鼠核因子κB受體活化劑配體(RANKL)elisa檢測試劑盒
大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)elisa分析檢測試劑盒
NEUROG基因甲基化程度定量分析試劑盒盒
人B細胞活化因子(BAFF)elisa分析檢測試劑盒
小鼠腎上腺素能受體α1A(ADRα1A)elisa檢測試劑盒
大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)elisa分析檢測試劑盒
通用型二氧化碳（CO2）濃度酶偶聯(lián)反應比色法定量檢測試劑盒
人P0蛋白抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
誘捕受體3抗體 DcR3
早老素γ分泌酶抗體 APH1a
非活性雙特異性磷酸酶抗體27抗體 Inactive DUSP27
富含亮氨酸樣酸性核蛋白抗體 LANPL
G蛋白偶聯(lián)受體7抗體 GPR7
Hermansky-Pudlak綜合征蛋白4抗體 HPS4
鳥嘌呤核苷酸交換因子FARP2抗體 FARP2
平滑肌蛋白抗體 Smoothelin
AF750標記的p53正向細胞凋亡調(diào)控因子抗體 BBC3/PUMA, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy7標記人CD16單克隆抗體 human CD16/APC-Cy7
精子發(fā)生相關(guān)蛋白5樣蛋白1抗體 SPATA5L1
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 CCDC8
TBC結(jié)構(gòu)域的蛋白激酶樣蛋白抗體 HSPC302/TBCK
T細胞識別的鱗狀細胞癌抗原抗體 SART1
唾液酸結(jié)合性球蛋白樣凝集素抗體 SIGLEC10
細胞表面球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子2重組兔單克隆抗體 LILRB1
雞HSP27抗體(IgG)ELISA ki
兔結(jié)腸成纖維細胞冰凍切片組織CDK6蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)elisa檢測試劑盒
A2MR; Alpha 2 macroglobulin receptor; alpha 2MR; APOER; Apolipoprotein E receptor; APR; CD 91; CD91; CD91 antigen; Low density lipoprotein receptor related protein 1; Low density lipoprotein related protein 1; LRP 1; LRP 515; LRP 85; LRP; LRP ICD; LRP1 protein; LRP515; LRP1_HUMAN.
兔結(jié)腸平滑肌細胞
小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞
SJSA-1人骨肉瘤細胞
H9c2(2-1)（大鼠心肌細胞）
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。