實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
直腸是自肛緣起向上 375px的一段大腸。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側。直腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。其中，上皮細胞主要位于粘膜層的上皮層，為單層柱狀上皮,含較多的杯狀細胞。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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直腸組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1305 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于手術切除的正常直腸組織。
2)細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：鋪路石樣，多角形細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠雙氫睪酮(DHT)elisa檢測試劑盒
大鼠穿孔素1(PRF1)elisa檢測試劑盒
小鼠生長停滯特異性蛋白6(GAS6)elisa檢測試劑盒
人Rho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)elisa分析檢測試劑盒
細胞EPHB4激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
猴補體片斷3b(C3b)elisa分析檢測試劑盒
檸檬酸化學法石蠟切片抗原修復處理試劑盒
小鼠淀粉樣蛋白β1-40(Aβ1-40)elisa檢測試劑盒
大鼠P物質(zhì)(SP)elisa分析檢測試劑盒
鋅指蛋白99抗體 ZNF99
雄受體抗體 Androgen receptor
促甲狀腺素受體抗體 TSHR
蛋白O巖藻糖基轉移酶1抗體 POFUT1
ENPP4蛋白抗體 ENPP4
FAM210B蛋白抗體 FAM210B
磷酸化天冬氨酰氨基肽酶(S109)抗體 phospho-DNPEP (Ser109)
磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體 phospho-EIF4B (Ser406)
14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體 14-3-3 Alpha + Beta + Gamma + Delta + Epsilon
1號染色體開放閱讀框54抗體 C1orf54
環(huán)指蛋白21抗體 RNF21
肌管素相關蛋白2抗體 MTMR2
PE標記人CD105單克隆抗體 human CD105/PE
PE標記小鼠Ly-6C單克隆抗體 mouse Ly-6C/PE
視桿細胞相關蛋白MREG抗體 DSU
絲氨酸蛋白酶45抗體 PRS45
（TOLUIDINE BLUE）原位染色試劑盒
人直腸上皮細胞人球蛋白M（IgM）elisa檢測試劑盒
大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測試劑盒
Gamma-glutamyltransferase 7 heavy chain; D20S101; dJ18C9.2; Gamma glutamyltransferase 4; Gamma glutamyltransferase 7; Gamma glutamyltransferase like 3; Gamma glutamyltransferase like 5; Gamma glutamyltranspeptidase 7; Gamma glutamyltranspeptidase like 3; GGT 7; GGT4; GGTL3; GGTL5; GGT7_HUMAN.
人直腸上皮細胞
人肝外膽管上皮細胞
RKO人結腸癌細胞
RAG小鼠腎腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。